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Elisa實驗：ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作流程
一、實驗前準(zhǔn)備
試劑平衡?
從2-8℃取出試劑盒，所有組分(包括酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測抗體等)需室溫平衡30分鐘，避免冷凝水干擾?。
濃縮洗滌液若有結(jié)晶，需37℃水浴至溶解?。
耗材檢查?
核對試劑盒組分與說明書是否一致，確認(rèn)酶標(biāo)板無破損、污染?。
未使用的板條需密封后冷藏保存?。
二、標(biāo)準(zhǔn)品與樣本處理
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?
凍干標(biāo)準(zhǔn)品需離心后加指定體積稀釋液溶解，渦旋混勻?。
梯度稀釋建議使用1.5mL EP管，按2倍比例逐級稀釋(如S7→S0)，每步需換槍頭并充分混勻?。
樣本預(yù)處理?
細(xì)胞上清需3000rpm離心10分鐘去除雜質(zhì)?。
高濃度樣本需按說明書稀釋(如5倍)?。
三、加樣與孵育
孔位布局?
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔(梯度濃度)、樣本孔(建議復(fù)孔)、空白孔(僅加稀釋液)?。
加樣體積通常為50-100μL，槍頭需懸空垂直加液，避免觸碰孔壁?。
孵育條件?
加入檢測抗體后，37℃避光孵育1-2小時，震蕩(300rpm)可提高結(jié)合效率?。
四、洗滌與顯色
洗板規(guī)范?
手工洗板：每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復(fù)3-5次，最后拍干?。
自動洗板機(jī)建議設(shè)置30秒浸泡程序?。
顯色控制?
底物(如TMB)需避光操作，37℃孵育15-30分鐘，顯色至孔內(nèi)液體變藍(lán)?。
終止液加入后5分鐘內(nèi)需完成讀數(shù)(顏色變黃)?。
五、數(shù)據(jù)讀取與分析
酶標(biāo)儀設(shè)置?
雙波長檢測(主波長450nm，參考波長630nm)，避免孔間干擾?。
標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合?
使用CurveExpert或Excel擬合4參數(shù)曲線，計算樣本濃度?。
六、注意事項
關(guān)鍵控制點?：
避免酶標(biāo)板長時間暴露于室溫，孵育時需密封?。
不同批次試劑不可混用，HRP工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用?。
異常處理?：
顯色過淺：檢查孵育時間或底物活性?。
背景過高：洗滌不充分或抗體濃度過高?。
(注：具體操作需以試劑盒說明書為準(zhǔn)，不同品牌可能存在細(xì)節(jié)差異?。)
BS-1502人內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
BS-2489小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
BS-3364大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
注：以上資料僅供參考，不作為實驗數(shù)據(jù)，具體請咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師;
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