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以下是關于人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合指南：
BS-10001 人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法，通過預包被在酶標板上的抗VEGF抗體捕獲樣本中的VEGF，再與HRP標記的檢測抗體形成復合物，經(jīng)TMB顯色后測定OD值，濃度與顏色深淺成正比。
二、試劑盒組成
核心組分?：預包被酶標板(96孔)、標準品(40ng/瓶)、HRP標記抗體、TMB底物、終止液
輔助溶液?：20×濃縮洗滌液(需1:20稀釋)、10×標本稀釋液(需1:10稀釋)
三、樣本處理
血清/血漿?：3000rpm離心10-30分鐘，避免反復凍融
細胞上清?：離心去除顆粒物，分裝保存于-20℃
組織勻漿?：生理鹽水搗碎后離心取上清
四、標準品配制
標準品用1ml蒸餾水復溶(40ng/ml)
梯度稀釋：依次進行對倍稀釋(62.5-2000pg/mL)
五、實驗步驟
加樣?：標準品/樣本各100μL，37℃溫育2小時
洗滌?：手工洗板需浸泡1-2分鐘，重復3-5次，拍干
顯色?：
加TMB底物90μL，避光反應15-25分鐘
終止反應后立即測定450nm OD值
六、注意事項
保存條件?：試劑盒2-8℃保存，使用前室溫平衡60分鐘
交叉污染?：使用一次性吸頭，避免金屬接觸終止液
質量控制?：板內(nèi)變異系數(shù)<10%，板間<15%
七、結果計算
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制曲線，通過回歸方程計算樣本濃度。
注：本試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
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