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豬肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-8208 豬肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)ELISA試劑盒
以下是天津本生豬肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理：
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法(或一步夾心法)檢測樣本中的HB-EGF濃度。通過包被抗體捕獲目標蛋白，再結合酶標抗體形成復合物，經TMB顯色后測定OD值，濃度與吸光度呈正相關。
二、試劑盒組成
主要成分?
預包被微孔板
標準品(通常含凍干粉，需用稀釋液重構)
酶標抗體、顯色劑(A/B液)、終止液
濃縮洗滌液(需稀釋使用)
保存條件?
未開封試劑需2-8℃保存，標準品及樣本稀釋后建議分裝凍存(-20℃以下)，避免反復凍融。
三、樣本處理
血清/血漿?：離心去除雜質(1000×g，15-20分鐘)，溶血樣本不可用。
組織勻漿?：需用PBS沖洗后勻漿，離心取上清(5000×g，5-10分鐘)。
細胞培養上清?：直接離心(1000×g，20分鐘)后檢測。
四、操作步驟
標準品稀釋?：按說明書梯度稀釋(通常為2倍系列稀釋)。
加樣與溫育?：
每孔加入標準品或樣本100μL，37℃孵育1-2小時。
洗滌?：使用稀釋后的洗滌液洗板4-6次。
顯色與終止?：
加入TMB顯色液，避光反應10-15分鐘，后加終止液。
檢測?：450nm波長讀取OD值，繪制標準曲線計算濃度。
五、注意事項
避免試劑交叉污染，不同批號組件勿混用。
顯色時間需嚴格控制，強陽性樣本可能需進一步稀釋。
實驗前需平衡所有試劑至室溫(約30分鐘)。
如需具體參數(如標準品初始濃度、靈敏度等)，請參考試劑盒配套說明書或咨詢技術老師。
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