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以下是山羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合指南：
BS-6400 山羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒
一、實驗原理?
采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。包被微孔中的捕獲抗體與樣本中的IL-1β結合后，依次加入HRP標記的檢測抗體，經顯色反應(TMB底物)后，通過450nm波長測定OD值，濃度與顏色深淺呈正相關。
二、試劑盒組成?
微孔酶標板?：預包被抗體的96孔板(可拆卸)
標準品?：凍干粉(通常含6-8個濃度梯度，如10,000-156 pg/mL)，需用稀釋液復溶
檢測抗體?：HRP標記的檢測溶液A/B，需按1:100稀釋
洗滌緩沖液?：30倍濃縮液，使用前需蒸餾水稀釋
顯色底物?：TMB(A/B液分裝，避光保存)
終止液?：2N H?SO?溶液
三、樣本處理?
血清/血漿?：
采集后3000×g離心10分鐘(血清)或30分鐘(血漿，需抗凝劑處理)
避免溶血或脂血，分裝保存于-20℃，避免反復凍融
細胞上清/組織勻漿?：
離心去除顆粒(3000×g，10分鐘)，取上清檢測
四、操作步驟?
試劑平衡?：所有組分室溫平衡15-30分鐘，濃縮洗滌液需溶解結晶(可水浴加溫)
加樣?：
空白孔：不加樣品
標準孔：50μL系列濃度標準品
樣本孔：先加40μL稀釋液，再加10μL樣本(最終稀釋5倍)
溫育?：37℃孵育30分鐘，封板膜覆蓋
洗滌?：棄液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復5次，拍干
加酶標抗體?：每孔50μL HRP標記抗體(空白孔除外)
顯色?：避光加入TMB A/B液各50μL，37℃顯色10分鐘(藍色→黃色)
終止與檢測?：每孔加50μL終止液，立即用酶標儀測450nm OD值
五、注意事項?
質量控制?：每次實驗需做標準曲線及復孔，批內/批間CV應<12%
干擾因素?：避免細菌污染(內源性HRP導致假陽性)、溶血或反復凍融
保存條件?：未使用的板條需密封防潮，試劑2-8℃保存，禁止冷凍
六、結果計算?
以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制曲線，樣本濃度通過曲線方程計算后乘以稀釋倍數。若樣本OD值超出標準曲線范圍，需進一步稀釋后重測。
注：以上資料僅供參考，如需更詳細的參數(如靈敏度、檢測范圍)，請參考具體說明或是咨詢供應品牌商。
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