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人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書
BS-1691人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)ELISA試劑盒
以下是關(guān)于人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明，綜合了多個(gè)可靠來(lái)源的操作指南和技術(shù)要點(diǎn)?：
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法：將純化的EGFR捕獲抗體包被于微孔板形成固相抗體，依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后加入TMB底物顯色，顏色深度與EGFR濃度呈正相關(guān)，最終在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值?。
二、試劑盒組成
預(yù)包被酶標(biāo)板?：96孔或48孔配置?
標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉需用稀釋液復(fù)溶(典型濃度800pg/ml或4,000fmol/L)?
檢測(cè)抗體?：生物素標(biāo)記的抗EGFR抗體?
顯色系統(tǒng)?：TMB底物A/B、終止液?
洗滌緩沖液?：需按說(shuō)明書稀釋?
三、樣本處理
樣本類型 處理方法
血清/血漿 2-8℃離心20分鐘(1000g)，避免反復(fù)凍融?
組織勻漿 按1:9重量比加入PBS勻漿，5000g離心5-10分鐘?
細(xì)胞培養(yǎng)上清 直接離心(1000g，20分鐘)或-20℃保存?
四、操作步驟
加樣?
空白孔加稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)品孔梯度稀釋(建議雙孔檢測(cè))，樣本孔加50μl?
37℃孵育40分鐘?
洗滌?
使用1×洗滌液，每孔350μl，浸泡1-2分鐘后拍干，重復(fù)4-6次?
加檢測(cè)抗體?
每孔加100μl生物素化抗體工作液，37℃孵育30分鐘?
顯色與終止?
加入TMB底物避光反應(yīng)15-20分鐘，顯藍(lán)色后加終止液變黃色?
五、關(guān)鍵參數(shù)
檢測(cè)范圍?：3.9-250pg/mL(EGF)或156-10,000pg/mL(EGFR)?
靈敏度?：≤1.6pg/mL?
重復(fù)性?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%?
六、注意事項(xiàng)
所有液體組分使用前需充分混勻，避免泡沫?
不同濃度樣本需更換槍頭防止交叉污染?
顯色時(shí)間需根據(jù)實(shí)際調(diào)整，底物變藍(lán)即失效?
實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)按生物危害物處理?
注：以上資料僅供參考，如需具體品牌的操作視頻或標(biāo)準(zhǔn)曲線建立方法，可參考以下補(bǔ)充說(shuō)明?。
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