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大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-3008 大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒
以下是?大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒?的實驗使用說明書綜合整理：
一、實驗原理?
采用?雙抗體夾心法?或?固相夾心法?ELISA技術。通過包被抗體捕獲樣本中的TNF-β，再與酶標抗體形成復合物，經TMB顯色后，顏色深淺與TNF-β濃度成正比。
二、試劑盒組成?
核心組分?：
預包被微孔板(96孔)
標準品(濃度梯度：15.6~1000 pg/mL，凍干品需復溶)
酶標抗體(HRP標記)
顯色底物(TMB A/B)
終止液(2N H?SO?)
濃縮洗滌液(20×~30×)
需自備器材?：
酶標儀(450nm)、移液器(10~1000μL)
37℃恒溫箱、離心機(2000~5000×g)
三、樣本處理?
血清/血漿?：全血室溫靜置2小時后離心(1000×g，20分鐘)，避免溶血或脂血。
組織勻漿?：按1:9(重量:體積)加入PBS勻漿，離心取上清。
保存?：短期存于4℃，長期需分裝凍存于-20℃(避免反復凍融)。
四、操作步驟?
試劑準備?：
復溫：所有試劑室溫平衡30分鐘。
稀釋洗滌液(如20×→1×)。
標準品稀釋?：
按說明書梯度稀釋(如1000→500→250 pg/mL)。
加樣與溫育?：
加標準品/樣本(100μL/孔)，37℃孵育90分鐘。
洗滌3次(每孔加洗滌液靜置1分鐘后甩干)。
顯色與檢測?：
加TMB底物(90μL/孔)，避光反應15分鐘→終止液(50μL/孔)。
酶標儀讀取OD450nm值。
五、注意事項?
關鍵控制點?：
移液精度誤差≤2%，避免氣泡干擾。
顯色液需避光現配，終止液傾倒緩慢防濺。
數據計算?：
以標準曲線擬合樣本濃度(推薦四參數邏輯曲線)。
保存條件?：
未開封試劑盒：2-8℃保存6個月;開封后板條需密封防潮。
六、常見問題?
顯色異常?：檢查底物是否過期或污染。
高背景值?：洗滌不凈或樣本濃度過高(需稀釋)。
注：以上資料僅供參考，如需具體品牌試劑盒的完整說明，可咨詢技術老師或品牌供應商的詳細文檔。
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