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植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書
BS-258251-A 植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA檢測(cè)試劑盒
BS-258251-B 植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA檢測(cè)試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
植物達(dá)瑪烷二醇合酶(DS)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法，其核心步驟包括：
抗體包被：抗DS單克隆抗體預(yù)包被于96孔微孔板，形成固相捕獲層。
抗原結(jié)合：樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的DS與包被抗體特異性結(jié)合。
酶聯(lián)檢測(cè)：加入HRP標(biāo)記的二抗，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色定量：TMB底物催化顯色，終止液作用后于450nm測(cè)定吸光度，濃度與OD值正相關(guān)。
二、試劑盒組成
組分名稱規(guī)格/濃度保存條件
預(yù)包被微孔板96孔×1塊2-8℃(干燥)
DS標(biāo)準(zhǔn)品(凍干)2瓶(0.5-100ng/mL)-20℃(長(zhǎng)期)
生物素標(biāo)記抗體120μL(1:100)-20℃(避光)
HRP-鏈霉親和素120μL(1:100)-20℃(避光)
TMB底物溶液10mL2-8℃(避光)
終止液(2M H?SO?)10mL室溫
注：所有試劑使用前需平衡至室溫(20-30min) 。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
樣品處理
植物組織樣本需研磨后提取總蛋白，離心取上清，用樣本稀釋液稀釋至推薦濃度。
加樣與孵育
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃孵育90min。
洗滌3次(每次200μL洗滌液，靜置30s)。
檢測(cè)與顯色
加入100μL生物素標(biāo)記抗體，37℃孵育60min。
洗滌后加入100μL HRP-鏈霉親和素，避光孵育30min。
加入90μL TMB底物，避光顯色15min，終止后10min內(nèi)讀數(shù)。
四、數(shù)據(jù)分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo)，OD450值為縱坐標(biāo)，擬合四參數(shù)邏輯曲線。
樣本計(jì)算：根據(jù)曲線方程計(jì)算待測(cè)樣本濃度，建議復(fù)孔取平均值。
五、注意事項(xiàng)
靈敏度：檢測(cè)范圍0.5-100ng/mL，板內(nèi)/板間變異系數(shù)<8%。
干擾因素：避免樣本反復(fù)凍融或溶血，高脂樣本需離心處理。
有效期：試劑盒自生產(chǎn)日起6個(gè)月內(nèi)使用，部分組分需-20℃保存。
六、常見(jiàn)問(wèn)題
問(wèn)題現(xiàn)象可能原因解決方案
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不充分離心后靜置10min
顯色過(guò)淺孵育時(shí)間不足延長(zhǎng)顯色至20min
背景值高洗滌不增加洗滌次數(shù)至5次
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒
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