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小鼠丙氨酸氨基轉移酶(ALT)ELISA試劑盒實驗說明書
BS-2260小鼠丙氨酸氨基轉移酶(ALT)ELISA試劑盒
一、實驗原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，通過特異性抗體捕獲小鼠血清/血漿中的ALT，結合酶標二抗顯色反應，通過吸光度值定量檢測ALT活性。檢測范圍4.687-300U/L，靈敏度達1.17U/L 。
二、試劑組成
預包被微孔板：ALT抗體包被(96孔/板)
標準品：6瓶(0-100U/mL梯0度濃度)
酶標二抗：凈(6mL)
底物液：TMB顯色液(A/B各6mL)
終止液：2Mliusuan(6mL)
濃縮洗滌液：20×Tween-20緩沖液(20mL)
三、操作步驟
1. 樣本準備
采集小鼠全血至無內毒素試管，離心(3000rpm,10min)分離血清/血漿。
避免溶血、脂血樣本，短期保存(2-8℃≤48h)，長期需-80℃凍存(避免反復凍融)。
2. 檢測流程
步驟操作溫度/時間
1、標準品/樣本各100μL加至對應孔室溫
2、加入酶標二抗50μL，封板避光孵育37℃, 60min
3、洗滌液洗板3次(每次浸泡1min)-
4、加入底物液A/B各50μL37℃避光, 15min
5、加入終止液50μL，立即測450nm吸光度-
四、注意事項
試劑保存：未開封試劑2-8℃避光保存(有效期6個月)，開封后R1/R2需28天內用完。
操作規范：
移液器吸頭不可混用，避免交叉污染。
洗滌需凈，避免殘留氣泡。
安全防護：處理樣本時需戴手套，廢棄物按生物危害物處理。
五、結果計算
繪制標準曲線(濃度-OD值)，擬合線性方程。
樣本ALT活性(U/L)=(樣本OD值-空白OD值)/標準曲線斜率。
六、常見問題
高背景值：可能因洗滌不凈或底物曝光時間過長。
線性不佳：檢查標準品稀釋梯度或孵育溫度一致性。
注意：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
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