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大鼠表皮生長因子(EGF)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-2926大鼠表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),專用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中表皮生長因子(EGF)的含量。試劑盒僅供科研使用,不可用于臨床診斷。
二、檢測原理
雙抗體夾心法:
預(yù)包被抗大鼠EGF捕獲抗體的微孔板與樣本中EGF結(jié)合。
加入生物素標(biāo)記的檢測抗體,形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
經(jīng)洗滌后,加入TMB顯色底物,在HRP酶催化下顯藍(lán)色,酸終止后變黃色。
顏色深淺與樣本中EGF濃度呈正相關(guān),通過450nm波長測定吸光度(OD值),計(jì)算濃度。
三、試劑盒組成
組分96孔配置48孔配置保存條件
預(yù)包被酶標(biāo)板1塊(96孔)1塊(48孔)2-8℃
標(biāo)準(zhǔn)品0.3ml×6管0.3ml×6管2-8℃f
生物素化檢測抗體120μL60μL2-8℃
顯色液A/B各6mL各3mL避光,2-8℃
終止液6mL3mL2-8℃
20×濃縮洗滌液60mL30mL室溫
封板膜4張2張室溫
四、樣本處理與保存
血清:
室溫凝固10-20分鐘,2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘,取上清。
避免溶血,2-8℃保存≤48小時(shí),長期需凍存(-20℃或-80℃),避免反復(fù)凍融。
血漿:
使用EDTA/肝素抗凝,離心后取上清,處理方法同血清。
組織勻漿:
生理鹽水搗碎,離心取上清。
細(xì)胞上清:
離心去除顆粒,取上清液。
五、操作步驟
試劑準(zhǔn)備:
洗滌液:用蒸餾水1:20稀釋濃縮液。
標(biāo)準(zhǔn)品:按說明書梯度稀釋(如80-2.5 U/L)。
加樣:
每孔加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本,37℃溫育30分鐘。
洗滌:
每孔加滿洗滌液,浸泡30秒后甩干,重復(fù)5次。
顯色與終止:
加入HRP標(biāo)記抗體,37℃溫育30分鐘。
洗滌后,每孔加TMB顯色液避光反應(yīng)15分鐘,加終止液終止。
檢測:
450nm波長測定OD值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
六、注意事項(xiàng)
試劑平衡:冷藏試劑需室溫平衡15-30分鐘后再使用。
加樣精度:使用校準(zhǔn)的移液器,避免交叉污染。
顯色控制:TMB顯色后及時(shí)終止,避免過度反應(yīng)。
數(shù)據(jù)有效性:每次實(shí)驗(yàn)需同步做標(biāo)準(zhǔn)曲線,建議設(shè)復(fù)孔。
七、性能參數(shù)
檢測范圍:31.2-2000 pg/mL(具體以說明書為準(zhǔn))。
靈敏度:≤15.6 pg/mL。
有效期:6個(gè)月(2-8℃避光保存)。
八、自備器材
酶標(biāo)儀(450nm)、恒溫箱(37℃)、精密移液器(0.5-1000μL)。
注:本說明書基于ELISA通用技術(shù)整理,具體操作請以實(shí)際試劑盒說明書為準(zhǔn)。 (AI生成)
注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒
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